- 王俊兰;赵勇超;王兆琛;张楠;张家新;
为了阐明绵羊卵泡颗粒细胞功能调控机制,试验选取不同条件培养的绵羊卵泡壁层颗粒细胞(MGCs)和卵丘颗粒细胞(CCs),分别设置对照组、FSH组和GDF9+FSH组,利用qPCR、Western blot和免疫荧光法分别检测MGCs和CCs中NPPC和NPR2的mRNA和蛋白表达量。结果表明:对于壁层颗粒细胞,FSH组NPPC 12 h mRNA及12,24 h蛋白水平显著高于对照组(P<0.05),极显著低于GDF9+FSH组(P<0.01);体外培养16 h后,与对照组相比,FSH组NPR2 mRNA及蛋白表达水平显著提高(P<0.05),但与GDF9+FSH组差异不显著(P>0.05)。对于卵丘颗粒细胞,FSH组NPPC mRNA及蛋白水平极显著高于对照组和GDF9+FSH组(P<0.01);FSH组NPR2 mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组和GDF9+FSH组(P<0.05)。说明FSH可以显著提高体外培养的绵羊卵泡颗粒细胞中NPPC、NPR2的表达;GDF9可以促进FSH诱导的壁层颗粒细胞中NPPC的表达,但抑制了FSH诱导的卵丘细胞颗粒细胞中NPR2的表达。
2023年01期 v.31;No.148 1-7页 [查看摘要][在线阅读][下载 2309K] - 王俊兰;赵勇超;王兆琛;张楠;张家新;
为了阐明绵羊卵泡颗粒细胞功能调控机制,试验选取不同条件培养的绵羊卵泡壁层颗粒细胞(MGCs)和卵丘颗粒细胞(CCs),分别设置对照组、FSH组和GDF9+FSH组,利用qPCR、Western blot和免疫荧光法分别检测MGCs和CCs中NPPC和NPR2的mRNA和蛋白表达量。结果表明:对于壁层颗粒细胞,FSH组NPPC 12 h mRNA及12,24 h蛋白水平显著高于对照组(P<0.05),极显著低于GDF9+FSH组(P<0.01);体外培养16 h后,与对照组相比,FSH组NPR2 mRNA及蛋白表达水平显著提高(P<0.05),但与GDF9+FSH组差异不显著(P>0.05)。对于卵丘颗粒细胞,FSH组NPPC mRNA及蛋白水平极显著高于对照组和GDF9+FSH组(P<0.01);FSH组NPR2 mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组和GDF9+FSH组(P<0.05)。说明FSH可以显著提高体外培养的绵羊卵泡颗粒细胞中NPPC、NPR2的表达;GDF9可以促进FSH诱导的壁层颗粒细胞中NPPC的表达,但抑制了FSH诱导的卵丘细胞颗粒细胞中NPR2的表达。
2023年01期 v.31;No.148 1-7页 [查看摘要][在线阅读][下载 2309K] - 王晓静;赵世玉;刘毅恒;刘家齐;徐志谦;李晓霞;栗颖华;禹学礼;
为了探究羟基磷灰石(HA)纳米颗粒对牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响,试验以牛卵巢中GV期卵母细胞作为试验材料,将不同粒径的HA纳米颗粒添加到玻璃化冷冻液中,进行超声分散检测。首先,以卵母细胞存活率和成熟率为指标,将0、0.01%、0.05%、0.1%HA纳米颗粒分别添加到玻璃化冷冻液Ⅰ(VSⅠ)和玻璃化冷冻液Ⅱ(VSⅡ)中,不经冷冻直接进行毒性测试;然后,以形态正常率、成熟率、卵裂率和囊胚率为指标测定卵母细胞玻璃化冷冻后的发育能力;最后检测含有0.05%HA纳米颗粒的VSⅡ对冷冻后卵母细胞活性氧水平和线粒体膜电位水平的影响。结果表明:不同浓度HA纳米颗粒对牛GV期卵母细胞均无明显毒性;VSⅡ+0.05%HA纳米颗粒组卵母细胞冷冻后的形态正常率、成熟率、卵裂率、囊胚率显著高于VSⅠ+0.05%HA纳米颗粒组(P<0.05);VSⅡ+0.05%HA纳米颗粒组卵母细胞的活性氧水平显著低于VSⅡ组(P<0.05);VSⅡ+0.05%HA纳米颗粒组卵母细胞的线粒体膜电位水平显著高于VSⅡ组(P<0.05)。说明在VSⅡ中加入0.05%HA纳米颗粒能显著降低牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻后活性氧水平并提高其线粒体膜电位水平,从而可能降低了玻璃化冷冻对细胞的损伤。
2023年01期 v.31;No.148 7-13页 [查看摘要][在线阅读][下载 1032K] - 王晓静;赵世玉;刘毅恒;刘家齐;徐志谦;李晓霞;栗颖华;禹学礼;
为了探究羟基磷灰石(HA)纳米颗粒对牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响,试验以牛卵巢中GV期卵母细胞作为试验材料,将不同粒径的HA纳米颗粒添加到玻璃化冷冻液中,进行超声分散检测。首先,以卵母细胞存活率和成熟率为指标,将0、0.01%、0.05%、0.1%HA纳米颗粒分别添加到玻璃化冷冻液Ⅰ(VSⅠ)和玻璃化冷冻液Ⅱ(VSⅡ)中,不经冷冻直接进行毒性测试;然后,以形态正常率、成熟率、卵裂率和囊胚率为指标测定卵母细胞玻璃化冷冻后的发育能力;最后检测含有0.05%HA纳米颗粒的VSⅡ对冷冻后卵母细胞活性氧水平和线粒体膜电位水平的影响。结果表明:不同浓度HA纳米颗粒对牛GV期卵母细胞均无明显毒性;VSⅡ+0.05%HA纳米颗粒组卵母细胞冷冻后的形态正常率、成熟率、卵裂率、囊胚率显著高于VSⅠ+0.05%HA纳米颗粒组(P<0.05);VSⅡ+0.05%HA纳米颗粒组卵母细胞的活性氧水平显著低于VSⅡ组(P<0.05);VSⅡ+0.05%HA纳米颗粒组卵母细胞的线粒体膜电位水平显著高于VSⅡ组(P<0.05)。说明在VSⅡ中加入0.05%HA纳米颗粒能显著降低牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻后活性氧水平并提高其线粒体膜电位水平,从而可能降低了玻璃化冷冻对细胞的损伤。
2023年01期 v.31;No.148 7-13页 [查看摘要][在线阅读][下载 1032K] - 陈晓琳;王心雨;郑帅;夏彦玲;
为了为深入研究梅花鹿窖蛋白-1(Caveolin-1, CAV1)基因的生物学功能提供数据支持,试验利用RT-PCR和分子克隆技术获得梅花鹿CAV1基因CDS序列并对其进行生物信息学分析。结果表明:梅花鹿CAV1基因序列与马鹿、山羊相似度较高,与加拿大猞猁、智人等相似度较低;CDS区长537 bp,编码178个氨基酸;CAV1蛋白是Caveolin家族的一员,在第97~119位存在1个跨膜螺旋区,为疏水性稳定酸性蛋白,无信号肽;该蛋白中α-螺旋和无规则卷曲占比较高,亚细胞定位主要在细胞膜;CAV1蛋白有13个磷酸化位点,1个乙酰化位点;CAV1蛋白参与细胞内吞作用、黏着斑、细菌侵袭上皮细胞等通路;该蛋白与CAV2、NOS3、EGFR、FYN等蛋白存在相互作用。
2023年01期 v.31;No.148 14-19+25页 [查看摘要][在线阅读][下载 2338K] - 陈晓琳;王心雨;郑帅;夏彦玲;
为了为深入研究梅花鹿窖蛋白-1(Caveolin-1, CAV1)基因的生物学功能提供数据支持,试验利用RT-PCR和分子克隆技术获得梅花鹿CAV1基因CDS序列并对其进行生物信息学分析。结果表明:梅花鹿CAV1基因序列与马鹿、山羊相似度较高,与加拿大猞猁、智人等相似度较低;CDS区长537 bp,编码178个氨基酸;CAV1蛋白是Caveolin家族的一员,在第97~119位存在1个跨膜螺旋区,为疏水性稳定酸性蛋白,无信号肽;该蛋白中α-螺旋和无规则卷曲占比较高,亚细胞定位主要在细胞膜;CAV1蛋白有13个磷酸化位点,1个乙酰化位点;CAV1蛋白参与细胞内吞作用、黏着斑、细菌侵袭上皮细胞等通路;该蛋白与CAV2、NOS3、EGFR、FYN等蛋白存在相互作用。
2023年01期 v.31;No.148 14-19+25页 [查看摘要][在线阅读][下载 2338K] - 刘楠楠;左昕晨;皮文辉;
为了研究Cas9 RNPs用于绵羊FecB基因分型的可行性,试验以FecB基因BB、B+、++型的绵羊个体为试验动物提取基因组DNA。基于Cas9 RNPs的体外DNA定点内切酶活性,用FecB基因靶位点的特异性引物扩增产物作为底物,利用大肠杆菌共表达纯化获得Cas9 RNPs,对不同FecB基因型目标样本进行酶切检测。结果表明:SDS-PAGE电泳结果显示,在130~180 kD之间有一条与预期大小相符的特异蛋白条带;3种基因型的靶DNA均被切割为185 bp和368 bp两个片段;绵羊FecB++型成纤维细胞Cas9 RNPs电转染的突变检测结果显示,纯化的两个Cas9 RNPs都具有基因组编辑活性。说明本研究获得的Cas9 RNPs在体外和细胞内都具有良好的酶活性,但未能区分绵羊FecB基因型。
2023年01期 v.31;No.148 20-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 1272K] - 刘楠楠;左昕晨;皮文辉;
为了研究Cas9 RNPs用于绵羊FecB基因分型的可行性,试验以FecB基因BB、B+、++型的绵羊个体为试验动物提取基因组DNA。基于Cas9 RNPs的体外DNA定点内切酶活性,用FecB基因靶位点的特异性引物扩增产物作为底物,利用大肠杆菌共表达纯化获得Cas9 RNPs,对不同FecB基因型目标样本进行酶切检测。结果表明:SDS-PAGE电泳结果显示,在130~180 kD之间有一条与预期大小相符的特异蛋白条带;3种基因型的靶DNA均被切割为185 bp和368 bp两个片段;绵羊FecB++型成纤维细胞Cas9 RNPs电转染的突变检测结果显示,纯化的两个Cas9 RNPs都具有基因组编辑活性。说明本研究获得的Cas9 RNPs在体外和细胞内都具有良好的酶活性,但未能区分绵羊FecB基因型。
2023年01期 v.31;No.148 20-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 1272K] - 曹倍嘉;秦建鹏;潘波;QAZIIzhar Hyder;叶疆凤;房义;周光斌;
卵母细胞超低温冷冻保存在人工辅助生殖和畜牧业上已有广泛应用。然而,超低温冷冻保存造成卵母细胞活性氧大量累积,引发一系列氧化应激,最终导致卵母细胞体内外发育潜力下降。卵母细胞内源的抗氧化酶无法彻底对抗氧化应激,因此在冷冻过程中常添加外源抗氧化剂来减少氧化损伤。文章着重分析了冷冻诱导卵母细胞产生的各种氧化应激、抗氧化剂对抗氧化损伤的效果及其作用机制,为提高卵母细胞冷冻保存效率提供参考。
2023年01期 v.31;No.148 26-31+37页 [查看摘要][在线阅读][下载 2101K] - 曹倍嘉;秦建鹏;潘波;QAZIIzhar Hyder;叶疆凤;房义;周光斌;
卵母细胞超低温冷冻保存在人工辅助生殖和畜牧业上已有广泛应用。然而,超低温冷冻保存造成卵母细胞活性氧大量累积,引发一系列氧化应激,最终导致卵母细胞体内外发育潜力下降。卵母细胞内源的抗氧化酶无法彻底对抗氧化应激,因此在冷冻过程中常添加外源抗氧化剂来减少氧化损伤。文章着重分析了冷冻诱导卵母细胞产生的各种氧化应激、抗氧化剂对抗氧化损伤的效果及其作用机制,为提高卵母细胞冷冻保存效率提供参考。
2023年01期 v.31;No.148 26-31+37页 [查看摘要][在线阅读][下载 2101K] - 王皓琪;郑毅;马一然;张嘉保;袁宝;
垂体促卵泡素(follicle-stimulating hormone, FSH)具有调节配子发生、类固醇激素生成、细胞代谢等功能,在哺乳动物的繁殖活动中起着十分重要的作用。作为转化因子-β超家族(TGF-β superfamily)成员之一,激活素A(Activin A)能够选择性促进FSH的合成与分泌。文章就激活素A的生物学功能与其调控FSH合成与分泌的最新研究进展进行了梳理与总结,为进一步深入探索激活素A的功能及开发动物繁殖人工调控相关激素制品提供理论参考与依据。
2023年01期 v.31;No.148 32-37页 [查看摘要][在线阅读][下载 1179K] - 王皓琪;郑毅;马一然;张嘉保;袁宝;
垂体促卵泡素(follicle-stimulating hormone, FSH)具有调节配子发生、类固醇激素生成、细胞代谢等功能,在哺乳动物的繁殖活动中起着十分重要的作用。作为转化因子-β超家族(TGF-β superfamily)成员之一,激活素A(Activin A)能够选择性促进FSH的合成与分泌。文章就激活素A的生物学功能与其调控FSH合成与分泌的最新研究进展进行了梳理与总结,为进一步深入探索激活素A的功能及开发动物繁殖人工调控相关激素制品提供理论参考与依据。
2023年01期 v.31;No.148 32-37页 [查看摘要][在线阅读][下载 1179K] - 张昆环;孙少琛;
ADP-核糖基化因子(Arf)属于小GTP酶的Ras超家族,与其他Ras相关的GTP结合蛋白一样,Arf蛋白在其活性GTP结合和非活性GDP结合构象之间循环。在酵母中其参与高尔基体和核内体的结构并发挥功能。在哺乳动物中Arf家族共包含了六个成员,基于大小和氨基酸序列同一性,这六种Arf蛋白可分为三类,Ⅰ类包括Arf1、Arf2和Arf3,Ⅱ类包括Arf4和Arf5,Ⅲ类包括Arf6。Arf蛋白在生物体内普遍表达,通过膜蛋白、细胞骨架调节因子的膜募集等协调细胞中的囊泡运输。同时,Arf蛋白还参与脂质信号传导和脂质代谢调节脂质介导的非囊泡运输。因此,Arf蛋白在有丝分裂、减数分裂、肌动蛋白细胞骨架、纤毛运输中均发挥重要功能。文章阐述了Arf蛋白家族成员在哺乳动物中的作用机制与功能,并对其未来研究进行了展望。
2023年01期 v.31;No.148 38-42页 [查看摘要][在线阅读][下载 1196K] - 张昆环;孙少琛;
ADP-核糖基化因子(Arf)属于小GTP酶的Ras超家族,与其他Ras相关的GTP结合蛋白一样,Arf蛋白在其活性GTP结合和非活性GDP结合构象之间循环。在酵母中其参与高尔基体和核内体的结构并发挥功能。在哺乳动物中Arf家族共包含了六个成员,基于大小和氨基酸序列同一性,这六种Arf蛋白可分为三类,Ⅰ类包括Arf1、Arf2和Arf3,Ⅱ类包括Arf4和Arf5,Ⅲ类包括Arf6。Arf蛋白在生物体内普遍表达,通过膜蛋白、细胞骨架调节因子的膜募集等协调细胞中的囊泡运输。同时,Arf蛋白还参与脂质信号传导和脂质代谢调节脂质介导的非囊泡运输。因此,Arf蛋白在有丝分裂、减数分裂、肌动蛋白细胞骨架、纤毛运输中均发挥重要功能。文章阐述了Arf蛋白家族成员在哺乳动物中的作用机制与功能,并对其未来研究进行了展望。
2023年01期 v.31;No.148 38-42页 [查看摘要][在线阅读][下载 1196K]